材料和方法
1，实验动物
选用C57BL/6J小鼠和SD大鼠，刁雄不限量，由河南省实验动物中心提供。常年室温在22~ 25℃.相对
湿度60~70％环境下饲养。定期进行消毒,房间使用面积5om3,按自然环境昼夜节律采光,自由选择进食和饮水。Po（第0天0）的图片是这一天。
2．视网膜整体铺片.切片制作及免疫组织化学染色
视网膜铺片采用不同年龄组（P1 .P3 . P5 、 P7 、P10 ,P14,P30）的小鼠各12只,切片采用不同年龄组的大鼠各6只。用1％戊巴比妥钠按20mg/kg 体重腹腔注射麻醉后，用4％多聚甲醛（ parafornaldehyde ，PFA，0. 1mol/L PB 配置）经左心室进行灌流,取出眼球,剪去眼前节（角膜﹑品状体） ,体视显微镜下小心剥离出视网膜。将视网膜组织剪成“+”字花形,放入4％PFA 4℃固定2 ~3h。然后在0.Ol mol/L PBS （ pH 7.4）中漂洗3 次,每次l5 min。将其与抗蚀剂4°C孵育2至3D。所用一抗分别为兔抗鼠胶质细胞纤维具有酸性功能蛋白（ glial fibrillaryacidicprotein ,GFAP,1 : 200 ,北京中杉金桥国际生物信息技术发展有限责任公司）和兔抗鼠Ⅳ型胶原结合蛋白（ Collagen N , Col N .1∶ 200 ,AB756P;Chemicon公司）。0.o1mol/l PBS冲洗3次，每次15min。二抗Alexx Fluro 568标记羊抗兔 lIgG （ 1 : 600 ,Invitrogen公司）4℃孵育过夜。 0.01mal/LPBS冲洗3次，15分钟。 每个人将视网膜相关神经节细胞层结构向上平铺在一个干净的载玻片上,滴加封片剂,加盖盖玻片,指甲油封固四周,晾干后在荧光电子显微镜（BX61 , Olympus）下观察摄片。制作切片时将固定好的视网膜依次浸泡在10％ , 20％ ,30％蔗糖溶液（0. 1 mol/L. PB配置）中脱水至下沉,然后将视网膜平铺在干净的载玻片上,吸干周围多余的蔗糖溶液,滴加胶水于视网膜上,置于冷冻切片机的冷台上快速冷冻成固体状,修成规则型,用冷冻切片机
切片,切片厚度为18m,切片腺干后进行组织化学染色,封片摄片。
