实验小鼠解剖器械临床应用
来源：未知 |发布时间：2021-06-02 17:47|点击:次
近年来新出现的一种简单的肝特异性转基因方法明显缩短了小鼠模型建立的时间，简化了相应的技术。该方法通过采用SleepingBeauty(SB)转座酶系统和基于流体动力学的转染(hydrodynamictransfection，HT)方法来创建HBx－转基因模型。
SB转座子是一种高效稳定的基因转移工具，它能通过“剪切－粘贴”的方式将外源目的基因整合入宿主细胞基因组中。以SB转座子作为递送系统，通过流体动力尾静脉注射将HBx基因整合入Fah-/-、Rag2-/-、Il2rγ-/-(FRG)小鼠的肝细胞中。
流体动力传递的过程诱导了肝炎症，随后携带HBx转基因的肝细胞进行选择性再繁殖，由此证实了单个HBx突变可以诱导肝细胞增殖。HT模型造模时间短是其优势之一，但两个明显的缺点在于:编码癌基因的转座子随机整合到染色体中，会影响整合位点或附近的细胞基因表达。其次，转座子中的癌基因通常被置于强启动子的控制之下，因此导致基因以极高的水平表达，不符合人体正常生理机制。
针对HBx转基因小鼠模型的研究发展迅速，应用也较为广泛。虽然HBx-Tg的建模成功率高且表型显著，但其局限性在于小鼠发生肿瘤之后进展过快，这与人类肝癌的缓慢演变大不相同。第二，小鼠肿瘤往往过于同质，无法正确反映人类肝癌的复杂性。特别是HBx-Tg仅能体现过表达x基因后对肝癌的促进作用，无法反映出完整病毒在自然感染状态下的致瘤效应。
1.2基于HBs转基因小鼠的肝癌模型(HBstransgenicmice,HBs-Tg)
HBVS基因所编码的表面抗原蛋白(HBsAg)也被认为起到促瘤发生的作用。上个世纪末期，已有报道提示年龄为14~16个月的近半数HBs转基因小鼠中可检测到自发形成的HCC。最近，研究者通过纳入CRISPR/Cas9技术靶向HBV的preS1/preS2和S编码序列，特异性敲除肝癌细胞系中的HBsAg，功能上进一步证实HBsAg所介导的细胞体外增殖和体内成瘤能力被显著抑制。机制上则阐明HBsAg缺失可导致炎症通路关键分子白介素IL-6表达量降低，并抑制下游STAT3的信号转导与活化，提示HBsAg参与促发炎症是其可能的致瘤机制之一。
HBs-Tg在自然状态下持续表达HBsAg并表现出系统对该抗原的免疫耐受，因此，常应用于研究病毒相关肿瘤的适应性免疫反应。据此，Zong等通过阻断HBs-Tg小鼠的免疫检查点受体分子TIGIT(TcellimmunoglobulinandITIMdomain)，同时持续接种乙肝疫苗，观察到这种联合处理所引起的过度免疫反应可诱导肝癌发生。肝癌在9个月龄转基因小鼠中的发生率可达63.64％，由此建立了新的HBV抗原特异性细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxicTlymphocyte，CTL)介导的病毒相关肝癌动物模型。值得注意的是，上述结果提示在HBV携带者中开展免疫检查点治疗，可能增加慢性肝炎和癌症的发生风险。
此外，还有研究人员在免疫系统完全的Fah-/-小鼠肝中通过脾注射转移HBs-Tg小鼠的肝细胞，同样证实了病毒特异性T细胞的活化是诱导小鼠发生肝癌的关键因素。该模型在6个月时的肿瘤发生率为100％，较强的免疫能力使其成为研究抗HBV适应性免疫和免疫病理学的有效工具。而最近一项研究提示，除了细胞杀伤性T细胞外，自然杀伤细胞(naturalkillercell，NKcell)被激活亦利于HBs-Tg小鼠发生肝癌。在该模型小鼠中连续8周使用自然杀伤细胞激活剂后，下游激活的IFN-γ效应分子可通过上调EpCAM-EMT信号轴使得全部小鼠在6个月后均发生肝癌。
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