啮齿类动物手术器械的使用方法
来源：未知 |发布时间：2021-05-17 14:08|点击:次
尾静脉注射THP-1细胞构建急性髓系白血病NOD/SCID啮齿类动物手术器械模型及其鉴定
急性髓系白血病(acutemyeloidleukemia,AML)是造血系统的异常性或低分化细胞的恶性肿瘤,其特征为克隆性和遗传异质性。
目前，AML的治疗方式主要有缓解诱导和后缓解治疗,包括化疗靶向治疗和HSCTl2J,但仅有部分患者的治疗效果显著。AML目前的复发率为50%,5年总生存率仅为35%-40%。
因此,探讨新的治疗方式显得尤为重要。动物模型是科研人员探索急性髓系白血病的治疗方法及药物应用的基础。目前,白血病小动物模型的建立主要依靠腹腔注射、皮下注射及尾静脉注射3种方式，而腹腔注射及皮下注射易形成局部肿瘤,很难模拟临床急性髓系白血病累及全身的特点。
本研究通过尾静脉注射急性单核白血病THP-1细胞,构建NOD/SCID啮齿类动物手术器械急性髓系白血病模型,模拟白血病全身播散的生物学特点，探讨急性髓系白血病M5动物模型建立方法，为今后研究急性髓系白血病的发病机制及治疗提供模型基础。
材料和方法
实验动物及预处理
SPF级NOD/SCID小鼠,3-4周龄,雌性,购于北京华阜康生物科技股份有限公司,动物质量合格证号:SCXK(京)2014-0004;饲养于遵义医科大学基础药理重点实验室动物实验中心SPF级层流室,实验动物饲养设施合格证号:SYXK(黔)2014-003。所购小鼠于SPF级动物房内常规饲养1周,标准颗粒饲养,饮水、垫料及一切与鼠接触物品均经灭菌处理。接种前每只小鼠给予腹腔注射环磷酰胺2mg/(kgd),预处理后24h内接种细胞。对啮齿类动物手术器械的所有操作均在无菌通风橱内进行。
试剂和仪器有：RPMI1640培养液,特级胎牛血清,PBS缓冲液,CD13抗体,无水乙醇、苏木素、二甲苯、伊红染液、盐酸等。倒置显微镜购，低速自动平衡离心机,CO2培养箱。
THP-1细胞的培养
THP-1细胞购于中国科学院上海细胞库,保存于本实验室。复苏后置于含有10%胎牛血清的RPMI1640培养液中,在379C、5%CO2的培养箱中培养，根据细胞生长情况及密度选择换液或传代，一般每2-3d换液传代1次。
THP-1细胞接种
收集对数生长期THP-1细胞悬液,置于无菌离心管内,106xg离心5min,去除上清,加PBS清洗3次,用2%台盼蓝计数活细胞数,用无血清培养液调整密度至25x107和50x10’/ml。
实验分组与接种
实验分为3组:模型A组和模型B组分别尾静脉注射THP-1细胞1x10'/只和5x10'/只,每只注射剂量为02ml;对照组注射生理盐水02ml/只观测指标
一般情况
接种后每天观察啮齿类动物手术器械的体重、进食、活动精神等情况并及时记录。
生存时间观察接种后小鼠的生存时间。
外周血采集、检测及涂片预处理前及接种后7、14、21和28d及处死前每只小鼠剪尾取血,制备血涂片并行血常规检测。制备好的血涂片行瑞氏染色,用显微镜进行白细胞计数、分类,计算未成熟粒单核细胞百分率;采集好的血样于血细胞分类计数仪上进行分析。
骨髓涂片的制备及观察脱颈处死濒死小鼠,于75%酒精中浸泡30min,取出啮齿类动物手术器械置于无菌弯盘内解剖,剥离出股骨及胫骨,去除多余的肌肉及组织，剪断股骨及胫骨两端,用抽有1ml无菌PBS的注射器插入骨髓腔,注人01mlPBS缓冲液,反复冲洗骨髓腔,直至髓腔成白色,将冲出的骨髓液滴于洁净的玻片上,用推片成45°角快速推至底部,晾干固定。将制备好的骨髓涂片行瑞氏染色，在光学显微镜下计数500个有核细胞并进行分类,计算原始单核细胞百分率。
病理组织学检查将濒死状态啮齿类动物手术器械脱颈处死，于75%酒精中浸泡30min后解剖,取出脾脏、肝脏、肾脏肺脏、心脏、股骨、胫骨,用4%甲醛固定,石蜡包埋切片,HE染色后用显微镜检查。选取股骨及脾脏组织块,切片后行免疫组织化学染色后用显微镜检查。
统计学分析
采用SPSS180统计软件进行单因素方差和t检验分析,所有数据均以均数士标准差表示。P<005为差异有统计学意义。
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