进口宠物医疗器械质量怎么样
来源：未知 |发布时间：2021-04-12 10:15|点击:次
材料和方法
1.1实验动物
12~15周龄的SPF级C57BL/6 ApoE-- ( ApoEknock out, ApoE KO)雄性小鼠,共计36只，体重在100g~150g,由北京协和医学院基础动物实验中心提供[ SYXK(京)2015-0025]。依照我院最新的动物实验管理办法,实验动物均在本实验室SPF级动物房饲养[SYXK(豫)2017-0015] ,适应性喂养一周后人组,进行相应的操作。在实验过程中,在3R原则的指导下给予实验动物人道主义关怀,并参照本院动物管理伦理委员会的相关规定有序进行,伦理编号( IACUC2020-027)。
1.2 主要试剂与仪器
羊抗大鼠3-磷酸甘油醛脱氢酶抗体( glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase , GAPDH);蛋白免疫印迹( Western blot) 试剂盒(生产批号:2017- 245KM);细胞裂解液(生产批号:5234kL-31);血管紧张素I( Ang II ,生产批号:S10950163 );JNK抑制剂SP600125(生产批号:45G099S);磷酸化JNK(p-JNK,生产批号: B785G-4 M)抗体; BCA蛋白浓度测定试剂盒(生产批号:BJ787420-M)、DAB化学发光试剂盒(生产批号:BJ7873560-M);二醇( MDA)检测试剂盒(生产批号:JGKK743 A-M)、超氧化物歧化酶( SOD)(生产批号:JGKK7404A-M)检测试剂盒和谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)检测试剂盒(生产批号:JGKK7255 A-M) ;双氯荧光素(2',7'dichlorfluorescein-diacetate, DCFH-DA)染色试剂盒(生产批号:DYZ40-3 M)。
CellInsight激光共聚焦显微镜; E-Gel Imager凝胶成像仪;DM2500生物显微镜; Ang I的痕量缓释泵(0.1ML/34DB);生理盐水微量缓释泵(1 mL/JK78) ; Multiskan MK3酶标仪(987 - 4BF);- 80C冰箱。
1.3 实验方法
1.3.1实验 分组和动物模型的构建造模前,采用以40 mg/kg的剂量的1%戊巴比妥钠腹腔注射将小鼠麻醉。参照文献将实验小鼠编号后随机分假手术组、模型组和JNK抑制剂SP600125干预组(抑制剂组)等三组(n= 12):假手术组背部肩胛间皮下手术植入预装生理盐水微量缓释泵,给与常规饲料喂养,模型组、抑制剂组小鼠背部肩胛间皮下手术植入AngI的痕量缓释泵( 1000 ng/( min. kg)) ;抑制剂组则在术前48 h分别给予腹腔注射JNK抑制剂SP600125(2 mg/kg)每天1mL进行预处理,假手术组和模型组则给予等体积的生理盐水代替。所有小鼠均以自由饮水、常规标准饲料喂养。
1.3.2小鼠腹动脉获取、直径测定及腹主动脉瘤发生率计算。
小鼠分组饲养28d,首先用无创血流变测量装置记录检测各组小鼠的心率和收缩压后,将小鼠麻醉后,剪断颈动脉取血。解剖镜观察腹动脉形态并拍照记录,精确测量其最大外径(将腹主动脉瘤定义为腹主动脉肾上段最大外侧宽度超过正常小鼠的50%),收集图片使用用Image-Pro Plus 6.0进行图片分析,求得各组小鼠的最大直径。根据实验需要,测量完成,将小鼠的动脉迅速转入液氮中,置于-80C深冷冰箱保存。
1.3.3 苏木精-伊红染色法( hematoxylin -eosinstaining, HE)观察炎性反应指标取出25%冰冻腹主动脉组织,采用10%的甲醛固定2h,二甲苯浸泡脱蜡,切片,HE染色观察,每个切片选取6个不同视野,光镜下观察小鼠血管壁、炎症细胞浸润情况。
1.3.4免疫组化检测基质金属酶2( matrixmetalloproteinases-2 , MMP-2)及MMP-9的水平取出25%冰冻腹主动脉组织,10%的多聚甲醛固定2 h,石蜡包埋并切片,双氧水室温下浸泡后,封闭,加入一抗4C过夜孵育,次日分别加入二抗,苏木素复染1.5~2 min,中性树胶封片,镜检观察并记录实验结果;染色评判标准以肿瘤细胞细胞膜和细胞质内出现黄色或棕黄色颗粒为阳性。
此文字最终解释权归河南宜慧康科技有限公司所有：详情请咨询河南宜慧康科技有限公司。
上一篇：啮齿类动物手术器械质量好吗？
下一篇：啮齿类动物手术器械临床实验结果
