小鼠固定器，小鼠固定架的价格贵吗？
来源：未知 |发布时间：2021-04-02 10:21|点击:次
小动物活体成像系统评价骨转移模型术后第5周起对小鼠定期进行小动物活体成像、X线及Micro-CT扫描，以判断小鼠是否发生骨转移。小动物活体成像:小鼠首先用1%戊巴比妥钠溶液(10 mL/kg)行腹腔注射麻醉，随后腹腔注射D-Luciferin底物(规格20 mg/mL,溶于PBS)0.15 mU只; 15 min后将小鼠平放入成像系统的暗室中，拍摄明场图像;切换至化学生物发光成像模式再拍摄，曝光时间2s;将明场图像与光子图像叠加，以确定生物发光信号位置。然后采用荧光成像模式拍摄，应用470 nm激发波长，525 nm发射波长，曝光时间为5 s。拍摄结束后，荧光图像与明场图像叠加，以确定荧光信号位置。
1.2.4 X 线摄片评价骨转移模型小 鼠用1%戊巴比妥钠溶液(10 mL/kg)行腹腔注射麻醉后，取仰卧位，采用小动物活体成像设备自带的X线进行X线摄片:电压50kV,电流45mA，曝光2ms.1.2.5 Micro-CT 扫描评价骨转移模型小 鼠用1% 戊巴比妥钠溶液(10 mL/kg)行腹腔注射麻醉，随后用Micro-CT监测小鼠骨转移情况。Micro-CT参数如下:电压50 kV,电流20 μA，曝光时间30 ms,角度增益0.7o拍片扫描结束后进行三维重建。
1.2.6 组织病理学检查 取材组织用多聚甲醛溶液固定后，清水冲洗干净，浸泡于10% EDTA溶液中，脱钙处理2周，处理期间每隔2 d换液一次，并用摇床振荡。脱钙结束后，流水冲洗2 h,随后进行组织的包埋、切片和苏木精-伊红(HE)染色(由复旦大学附属肿瘤医院病理科完成)。
2结果
2.1 GFP/Luc 双标记的肿瘤细胞验证
GFP/Luc双标记的人肺癌A549和NCI-H1299细胞为多边形上皮样细胞，贴壁生长。荧光显微镜下观察可见整个视野细胞荧光信号较强，且整个细胞的荧光分布均-一性好，转染率接近100%，并且随体外长期传代培养，荧光信号无明显消退。结果说明，GFP/Luc双标记的人肺癌A549和NCI-H1299细胞在体外能够稳定表达GFP，可以用于后续实验。
2.2影像学观察
2.2.1小 动物活体成像观察BALB/c-nu/nu小 鼠和NOD/SCID小鼠在注射A549和NCI-H1299细胞时，动物全部存活。建模5周时，发现部分小鼠开始出现消瘦、行动迟缓等症状;用小动物活体成像系统对动物模型进行实时动态监测，观察肺癌细胞在动物体内的成瘤和转移情况。化学发光成像的结果显示:在超声引导下左心室注射人肺癌细胞后，全部16只小鼠的中轴骨和四肢骨均出现Luc发光信号，说明心内注射后小鼠出现了肿瘤细胞骨转移。
与BALB/c-nu/nu小鼠相比，NOD/SCID小鼠的Luc发光区域面积更大，总荧光光子强度更高，说明肿瘤细胞在重度联合免疫缺陷小鼠体内更易于生长和转移。同时发现，NCI-H1299-GFP/Luc 细胞较A549-GFP/Luc细胞的Luc分布点位更多，发光面积更大，总荧光光子强度更高，说明不同人肺癌细胞心内注射后的体内转移能力存在一定差别，NCI-H1299-GFP/Luc细胞的体内转移能力较A549-GFP/Luc细胞强。
2.2.2 X 线及Micro-CT观察采用 人肺癌A549细胞，经超声引导进行NOD/SCID小鼠心内注射第8周时，小鼠出现消瘦、弓背、佝偻及明显活动受限等体征。通过X线摄片观察小鼠骨转移情况，并采用Micro-CT拍摄对动物模型全身骨骼进行三维重组。X线摄片发现，小鼠胫骨平台及肩关节处出现明显的骨破坏与骨不连续改变。小动物Micro-CT检测可见，小鼠胫骨平台和肩关节的骨质和骨膜均出现明显的缺损和破坏，骨正常组织形态消失;膝关节处完全被肿瘤组织侵占，呈融冰状溶骨性破坏;长骨骨质呈斑片状破坏，肩关节处呈虫蚀状破坏，这与临床上肺癌骨转移的表现有较好的一致性。
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