小鼠固定器、小鼠固定架的生产厂家
来源：未知 |发布时间：2021-04-01 14:23|点击:次
小鼠存活率及体质量变化观察
正常对照组,15.16、17和18Gy照射组每组8只小鼠，于照后每2d记录一次体质量,每日观察记录小鼠的面颊和口腔的病情变化,摄食和饮水情况，并记录存活数。
1.6 小鼠舌组织甲苯胺蓝染色组织及病理学观察实验每组3只小鼠于照射后9d颈椎脱臼活杀，取舌组织,先用棉签蘸取1%乙酸溶液涂于舌表面以溶解表面附着的黏液,再用棉，签蘸取1%甲苯胺蓝溶液涂抹于舌表面,至少停留1 min,最后用棉签蘸取1%乙酸擦洗舌表面,拍照观察。
1.7小鼠舌组织HE染色及定量分析
将上述甲苯胺蓝溶液染色后的舌组织在中间平面中部纵向切开(将溃疡分成相同的一半),所有标本均固定于甲醛(10%福尔马林)中24 h,经石蜡包埋。沿蜡块长轴横切,厚度为5μm。切片经脱蜡水合处理后HE染色。Olympus DP72 显微镜下观察、拍照。用Image Pro Plus 6.0软件测量上皮厚度进行定量分析。
1.8 小鼠舌组织Ki67免疫组织化学染色及定量分析
小鼠舌组织制成5 μm厚的切片,经脱蜡水合后置EDTA抗原修复液中,高压修复(> 1209C)5 min,恢复室温,PBS漂洗后,3%过氧化物酶孵育15min,以含5%山羊血清的TBST封闭1h,1:200稀释的Ki67抗体孵化过夜, PBS漂洗后,山羊抗兔抗体孵育1 h,进行DAB染色。Olympus DP72显微镜拍照，采用ImageProPlus6.0软件手动采点法计数阳性细胞,进行定量分析。
1.9 统计学分析
采用SPSS 17.0软件进行统计分析。数据以土s表示,采用Originlab软件包作图。Kaplan- Meier法进行生存分析,生存数据的比较采用Log-rank检验，体质量采用重复测量的方差分析，上皮厚度、角化细胞增殖的比较采用单因素多水平方差分析,根据方差齐性结果采用LSD检验或Tamhane'sT2检验进行事后比较。P <0.05为差异有统计学意义。
2结果
2.1不同照射剂量对小鼠体质量和存活的影响
在X射线头颈部局部照射15~18Gy后,小鼠面颊、颈部皮肤出现脱毛,嘴唇、鼻部皮肤红肿,照射后各组小鼠第1~3天摄食无明显变化，从第4天开始每日摄食量减少且口腔周围出现溃烂。
各照射组小鼠体质量自第5天开始持续下降,第10天降至最低值,第14天开始稳步回升。对各组小鼠体质量进行重复测量的方差分析,结果表明, 15~18Gy各照射组小鼠体质量与照射对照组相比较，差异均有统计学意义(P<0.001),各照射组之间无显著性差异。
经Kaplan-Meier生存分析, 15 Gy照射组小鼠30 d生存率为87.5%; 16 Gy照射组小鼠30d生存率为12.5%,中位生存时间为10.5 d(95%CI: 10~12),与对照组相比差异有统计学意义(P<0.001);17 Gy和18 Gy照射组小鼠在11 d内全部死亡，中位生存时间均为10 d( 95%CI:9~10),与对照组相比差异有统计学意义(P<0.001)。根据小鼠最低体质量时间和中位生存时间的结果,确定15~18Gy照射后第9天为可行的取材时间。
2.2 不同剂量X线照射后小鼠舌体大体观察
正常小鼠舌体黏膜呈粉红色、质嫩,甲苯胺蓝染液无着色。经X射线照射后,照射组小鼠舌黏膜下充血,舌背溃疡面产生,甚至出现水泡。甲苯胺蓝染色后病损区着色阳性。15、 16Gy X射线照射后,肉眼可见散在点状破损,随着照射剂量增加至.17和18Gy,舌背出现成片溃疡，舌体颜色变深。
2.3不同照射剂量对头颈部照射小鼠口腔黏膜的影响
正常小鼠舌黏膜组织结构完整,角化上皮细胞(舌尖、舌背)和非角化上皮细胞(舌腹)等结构正常。
X射线照射后，舌尖和舌背的角化上皮结构紊乱，基底层排列不连续,其下出现大量炎性细胞浸润,毛细血管扩张充血，上皮厚度变薄。在上皮厚度方面,以舌尖部分最敏感,15~18 Gy照射组舌尖黏膜厚度明显变薄,与正常组相比均有显著差异(P<0.001)。舌背的黏膜层在15Gy照射剂量下表现为黏膜增生，上皮厚度较正常组略微增加，但差异无统计学意义;16Gy照射时,角化上皮结构崩解,但上皮厚度与正常组相比差异无统计学意义;17、18Gy 照射时,舌背上皮厚度与正常组相比明显变薄,差异有统计学意义(P<0.001 )。
2.4 不同照射剂量对小鼠角化上皮细胞增殖的影响
正常组小鼠角化上皮细胞增殖明显，增殖的细胞在基底层紧密排列。经X射线照射后, Ki67增殖细胞迅速减少,以舌尖部分的上皮细胞增殖抑制作用最显著, 15~18 Gy照射均能显著减少Ki67阳性细胞数量(P<0.001)。
舌背的，上皮细胞在15Gy照射剂量下与正常组相比增殖细胞数量显著增加,差异有统计学意义(P<0.001),该结果与舌背在15 Gy照射剂量下黏膜层增生的结果一致;16Gy照射时,固有层增殖细胞排列紊乱,但增殖细胞数量与对照组相比无明显减少;17、18 Gy照射时,增殖细胞数显著降低,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05,P<0.001)。
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