进口宠物医疗器械的行情怎么样？
来源：未知 |发布时间：2021-03-25 09:43|点击:次
IL-2、IFN-Y.IL-4.IL-10、IL-17A、胃动素、血管活性肠肽的表达水平检测:取尾静脉血,离心取上清液,用ELISA试剂盒进行检测,将0.1 ml缓冲液加至反应孔内,4 C下孵育过夜后摒弃反应液,再加人0.1 ml样本,37 C下孵育60 min,后加入0.1 ml酶标抗体,37C下孵育60min,随后再加人TMB、硫酸,充分反应后将反应孔板置于酶标检测仪上测定IL-4、
IFN-γ.IL17.胃动素、血管活性肠肽的表达水平。
3.5 结肠传输时间:将直径1 mm的玻璃球经小鼠肛门逆插入2cm处,然后记录玻璃球从肛门排出的时间作为结肠传输时间。
3.6 各组胃平滑肌层Obestatin 及其受体GPR39表达:干预7 d结束后每组随机取3只小鼠，麻醉处死后冰_上进行开腹，游离大小网膜,取约4 cmX3 cm胃体,充分清洗后将胃平滑肌层充分剥离,冰浴中剪碎组织后加入蛋白裂解液,充分反应后4 °C10000 r/min,离心30 min,取上清液,测定蛋白浓度后制定标准蛋白曲线,随后将样本置于SDS-PAGE凝胶电泳分离出靶蛋白，随后将靶蛋白转移至PVDF膜，脱脂牛奶封闭后加入- -抗抗体(1 : 1000 稀释),4 C下孵育24 h后用PBS洗涤条带,加入AP标记的二抗(鼠抗兔1 : 1000),室温下孵育1 h后再用PBST洗脱3次,5 min/次,滴加ECL显影液显影摄片。
4统计学方法 采用SPSS 22.0统计学软件。
组间比较采用方差分析;组内比较采用配对t检验。所有数据均用均数士标准差表示,P<0.05表示差异有统计学意义。
结果
1各组小鼠腹泻次数比较见表1。空白组小鼠未出现腹泻现象,模型组及干预组小鼠在造模6 h内均出现黏液便/稀便。经过葛根干预后小鼠腹泻次数明显减少，与模型组比较,差异有统计学意义(P< <0.05)。造模后小鼠Th1、Th2细胞百分比、白细胞数量、中性粒细胞百分比、淋巴细胞百分比明显下降，Th17细胞百分比升高,与空白组比较,差异具有统计学意义(P<0.05),经过干预后，上述指标较前改善,与模型组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。
3、各组小鼠胃动素、血管活性肠肽、结肠传输时间表达比较。造模后IL-17A、胃动素、血管活性肠肽表达明显升高,IL-2、IFN-Y.IL-4、IL-10水平降低,结肠传输时间明显缩短,与空白组比较,差异有统计学意义(P<0.05),经过葛根干预后上述指标明显改善,与模型组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。
4各组胃平滑肌层Obestatin及其受体GPR39表达造模后小鼠胃平滑肌层Obestatin 及其受体GPR39表达明显下降,与空白组比较,差异有统计学意义(P<0.05),经过葛根干预后Obestatin、GPR39表达明显升高，与模型组比较差异有统计学意义。
本研究小鼠在经过致病性大肠杆菌感染后均出现了黏液便、稀便的症状,这是由于细菌导致模型鼠肠道黏膜完整性及上皮细胞受破坏，细菌毒素侵人导致肠道局部体液分泌增多而导致,由此我们发现小鼠外周血细胞成分也出现了变化,炎症细胞百分比明显升高，由此揭示本研究小鼠成功模拟肠道细菌感染,模型制备成功。
在本物究中我们发现Th1. Th2、Th17以及代表性因子IL-2.IFN-γ.IL-4、IL-10.IL-17A 表达已出现了变化，且胃平滑肌层的Obestatin及其受体GPR39,这意味着肠道黏膜免疫系统和全身的免疫系统均产生了应答。
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