小鼠固定架的使用方法
来源：未知 |发布时间：2021-03-20 09:20|点击:次
环氧合酶-2在小鼠月经样模型中对子宫内膜崩解剥脱的作用研究
月经是在子宫内分泌和旁分泌的影响下，子宫内膜为准备胚胎着床而经历一个增值、分化，在胚胎未植入情况下崩解脱落的循个。月经发生机制复杂,有关月经的生理现象还有许多问题有待探索。1957年,Pickles从人体月经股十定从山激平滑肌的物质,即前列脲系限速合环氧合酶Erux左成酶,可以催化花生四烯酸转化为Ps。环人在2种亚型,分别是环氧合爵-1(Ux- 小无酶-2(COx-2)4。与COX-1在计多组om和达不同的是,COX-2在如刖列豚﹑外、6-7日子宫等少数生殖组织中呈现高度锈子性衣ovo在生长因子或炎症因子的刺激下,细肥中的UA-也会被迅速诱导表达参与炎征反。相大以5一示,通过抑制COX-2的表达可以降低小眼T加达1有床率和妊娠率,恒河猴和狒狒的COX-2仕贝个期比在月经周期的增殖期表达更强然。此壮人类中,COX-2在经前期于宫内膜中的表达独丁排卵期。这些研究提示,COX-2在月经发生过程中起到关键作用。
由于研究无法在人体内进行十坝头应﹐月年生过程只在少数物种中存在﹐因此月绘和于吕个戏州出血等相关机制的研究受到伦理佬—头物什限制。小鼠月经样模型的建立在一定程度上打假了这一限制条件。本研究通过建立孕酮(Progesterone)生理性撤退小鼠月经样模型﹐使用COX-2特异性抑制剂 Dup,697.于预小鼠﹐探究COX-2蛋白在子宫内膜崩解时期的表达量变化以及COX-2在月经发生过程中的具体作用,为揭示月经发生机制提供线索,以及为临床治疗月经不规则出血提供理论依据。
材料与方法
一、研究对象
9～10周龄的SPFII 级C57BL6雌性小鼠40只,购自维通利华(实验动物许可证号:SCXK(京)2016-0006)。小鼠在可控的条件下给与充足的水和食物﹐光照时间8∶00～20 ∶00,温度为20℃士1℃。所有实验和外科手术都得到了国家卫生健康委科学技术研究所动物伦理委员会的批准。
二、研究方法
1．小鼠生理性月经样模型的建立:依据前期研究结果建立小鼠生理性孕酮撤退月经样模型(模型组,n=10):小鼠摘除卵巢休息一周后记为第1天,在第1～3天9∶00皮下注射100 ng雌二醇(E2),在第4～6天无处理,在第7天9∶00皮下注射5 ng E2和50 ng 孕酮,随后将含有孕酮的皮埋管植于小鼠背部皮下;在第8～9 天9:00继续皮下注射5 ng E2。在第9天11 :30,向小鼠的双侧子宫角内注射15 pl无菌花生油以诱导子宫蜕膜化;在子宫蜕膜化49 h后去除孕酮皮埋管﹐记为取材o h。小鼠分别在孕酮撤退后0 h.8 h、12 h.16 h以及24 h处死,将双侧子宫固定于4%多聚甲醛或用液氮冷冻并于―80℃保存备用。
2.COX-2蛋白的表达检测:利用western blot方法分别检测模型组小鼠子宫COX-2蛋白的表达量变化。首先,通过蛋白提取试剂盒(Invent Biotechnologies,美国)提取小鼠子宫组织蛋白并经 BCA法( ThermoScientific,美国)测定组织中的蛋白质浓度。蛋白总量50 ug 上样到10%SDS-PAGE进行凝胶电泳,随后转移至PVDF膜(Millipore,美国),5%脱脂奶粉封闭后,分别与COX-2蛋白单抗( sc-19999, Santa Cruz; 1 ∶200稀释)以及3-ACTIN多抗(60008-1-Ig,Proteintech;1 : 10 000稀释)在4℃孵育过夜，与HRP标记的二抗(SA00001-1, Proteintech;1 : 5 000稀释)进行蛋白免疫印迹反应﹐使用GelDocumentation And Image Analysis System检测蛋白条带和定量分析。
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