小白鼠固定架哪里有出售的
来源：未知 |发布时间：2021-05-28 15:18|点击:次
实验方法
1.3.1液体饲料的配制
由于饲料配制过程中涉及到一些重要的细节问题,所以以制备1L饲料(乙醇浓度4.8%)为例描述流体饲料的配制,配制过程如下:(1)称量130g的饲料粉和5g麦芽糖糊精;(2)将三分之一称量好的固体粉末倒入一个2.5L的玻璃瓶中,加入890mL温热的自来水(非蒸馏水),剧烈振摇后,磁力搅拌器搅拌5min;(3)待溶解均匀后,再加入三分之一固体粉末,继续搅拌约5min;(4)重复步骤(3),直至全部固体粉末溶解均匀,加入63.6mL的95%乙醇,充分混合后待喂食。同理配制对照饲料,由于不添加乙醇,所以缺失的能量用麦芽糖糊精补充,以平衡乙醇组中乙醇的卡路里。
固体粉末溶解过程同前所述,切记不可将固体粉末一次性全部溶解,由于固体饲料粘度很高,一次性倒入很难溶解。制备好的饲料应该冰箱保存,宜在3d内使用,防止饲料变质。
液体饲料喂养瓶添加饲料方法:用拇指堵住喂养孔,从上方填充液体饲料30mL,并旋紧螺帽。颠倒喂养管排除滞留的气泡,将其放置在鼠笼的喂养管固定器上。由于液体饲料极易变质,需要每天进行饲料更换和饲养瓶的清洗、高压,所以饲养瓶最好准备两套,可轮换使用。
1.3.2小鼠模型的建立
本研究采用乙醇量逐步增加的方式进行酒精性心肌病模型的构建。16周龄的雄性小鼠每笼三只,其中对照组(WT组)9只,乙醇组(WT+Alc组)21只,进行乙醇饲料或等热量麦芽糖糊精对照饲料喂养,共喂养8周,每两周升高一次乙醇含量(%,w/v),具体为:第1、2周是4.8%,第3、4周是5.0%,第5、6周是5.2%,第7、8周升高至5.4%。每三天配制一次液体饲料,冰箱冷藏,每天进行饲料的添加,添加量与前1d小鼠的食量相当。每周进行一次体重的测量,同时记录饲养过程中死亡小鼠个数。喂养8周后,对小鼠进行超声心动图检测,检测结束进行安乐死后,取心脏组织进行组织病理学检测。
1.3.3心脏超声检查
流体饲料喂养8周后,采用异氟烷气体麻醉的方式进行小鼠麻醉,脱去心前区的被毛,利用小动物心脏超声仪(探头型号:550)。记录左心室前壁厚度(leftventricularanteriorwall,LVAW)、左心室后壁厚度(leftventricularposteriorwall,LVPW)、左心室内径(leftventricularinternaldiameteratendsystole,LVID)等参数,射血分数(percentejectionfraction,EF%),短轴缩短率(percentfractionalshortening,FS%)由计算得出。
1.3.4小鼠心脏组织标本的获取和HE染色
液体饲料喂养8周后,行颈椎脱臼法进行安乐死,采用眼科剪打开胸腔,摘取心脏。PBS冲洗后用擦手纸吸拭心脏表面液体,称重后立即浸入4%多聚甲醛液体中进行固定,将固定管置于摇床上进行摇晃,使固定液充分浸入组织,固定48h后,流水冲洗30min,组织进行脱水、石蜡包埋。利用切片机将包埋好的蜡块按纵切面切片,厚度4μm,展台展开后用病理片捞起,常温晾干备用。
备用的切片68℃烘烤45min后,梯度乙醇脱蜡后,水冲洗1min,苏木精染液染色5min后水冲1min,1%盐酸乙醇分化2s,自来水冲洗泛蓝,0.5%的伊红染液浸入2min,水冲洗后放置70%乙醇中,然后梯度乙醇脱水,树脂封片,晾干后镜下观察,Leica显微镜拍摄图片。
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