河南宜慧康出售实验小鼠开口器
来源：未知 |发布时间：2021-05-14 09:16|点击:次
ESCCPDX小鼠模型的建立机实验小鼠开口器的应用
将患者手术切除的ESCC肿瘤组织存放于磷酸盐缓冲液(PBS)中,在30~60min内冰上运送至动物中心进行移植,用无菌器械将肿瘤切碎成约10-20mg的组织块,在小鼠下肢背部用70%酒精消毒并剪一小缺口,将切碎的组织块(10~20mg)塞人小鼠皮下,按压约2~3min防止组织块漏出。每例标本接种3~5只小鼠。当形成异种移植物时,我们将这些肿瘤定义为P1代,一旦P1代肿瘤达到1000mm,取下肿瘤,进行下一代移植，此为第2代小鼠,定义为P2,依此类推。实验小鼠开口器，所有动物实验均得到广东药科大学附属第一医院动物护理和使用委员会的批准。整个实验在无菌条件下进行。从肿瘤接种到肿瘤生长至体积约为250mm所用时间定义为成瘤时间。如果在4个月内肿瘤体积长至1000mm,则表明该模型成功。
1.4观察与计算公式
移植后每3d定期观测小鼠的活动状态,监测小鼠体重变化及肿瘤生长情况。通过游标卡尺每周2次测量肿瘤的大小，公式:(最长半径x最短半径)/2。
1.5HE染色
将小鼠颈椎脱臼后取下肿瘤,取部分放于4%多聚甲醛中固定24h,然后常规石蜡包埋,6pm厚度连续切片,脱蜡脱水后用苏木精染液染色3~5min。水洗反蓝,依次置于85%、95%的梯度酒精脱水后,放入伊红染液中染色3~5min。随后,用无水乙醇脱水和二甲苯透明并封片。实验小鼠开口器。
1.6免疫组化
切片2次二甲苯脱蜡后,无水乙醇不同浓度梯度(100%酒精~95%酒精~90%酒精~80%酒精~70%酒精)脱水,将切片置于柠檬酸盐缓冲液(0.01mol/L,pH6.0)中,将抗原回收溶液在高压锅中煮沸3min。然后用5%BSA封闭，置于37C温箱0.5h,后将切片与一抗在4C孵育过夜(Ki-671:500,P531:500)。然后,将切片与二抗(HRP标记)一起室温孵育1h,并用DAB染色。最后,将切片用苏木精复染、脱水、然后固定。实验小鼠开口器。
1.7RNA测序
从组织中提取总RNA,获取mRNA方式:是通过Oligo(dT)磁珠富集带有polyA尾的mRNA(真核生物),二是从总RNA中去除核糖体RNA,从而得到mRNA(原核生物)。以片段化的mRNA为模版,随机寡核苷酸为引物,在M-MuLV逆转录酶体系中合成cDNA第一条链,随后用RNaseH降解RNA链,并在DNApolymeraseI体系下，以dNTPs为原料合成cDNA第二条链。纯化后的双链cDNA经过末端修复、加A尾并连接测序接头,用AMPureXPbeads筛选200bp左右的cDNA,进行PCR扩增并再次使用AMPureXPbeads纯化PCR产物,最终获得文库，把构建好的文库按照有效浓度及目标下机数据量的需求pooling后进行IlluminaHiSeq测序。实验小鼠开口器。
1.8统计分析
使用SPSS22.0软件分析所有数据。用卡方检验评估移植瘤成瘤率率与临床病理参数之间的关系。采用1检验比较NSG小鼠组和BALB/c裸鼠组成瘤率和成瘤时间,当P<0.05时认为差异有统计学意义。
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