进口啮齿类动物手术器械贵吗
来源：未知 |发布时间：2021-05-13 14:33|点击:次
一步法实时荧光定量PCR方法的确定针对啮齿类动物手术器械。
在获得质粒标准品之后,使用分光光度计测定,测得质粒原液DNA浓度为1035ng/μL。根据计算公式:质粒拷贝数(Copies/μL)=6.02x102(Copies/mol)x质粒浓度(gμL)/质粒分子量(g/mol);原倍质粒拷贝数为4.96x10"Copies/uL,连续十倍稀释,做6个稀释度,分别使用102~107倍稀释的标准品作为模板进行qRT-PCR,建立扩增曲线和标准曲线。图1中1~6为不同的稀释度,分别为4.96x10*~4.96x10°Copies/uL,可见各梯度间隔得临界循环数(thresholdcycle,Ct)基本相等,约3个循环左右;以II型登革病毒标准品稀释拷贝数的对数值为横坐标,以Ct值为纵坐标建立实时荧光定量PCR的标准曲线。由标准曲线得出扩增效率为95.8%,相关系数R2=0.999,表明该PCR方法扩增效率较高,线性关系良好。啮齿类动物手术器械。
2.2荧光定量PCR方法的评估
2.2.1灵敏性分析
为了解该PCR方法的灵敏性,将II型登革病毒标准品进行十倍连续稀释(4.96~49.6x10'Copies/μL),分别进行PCR检测。结果表明:浓度为4.96x10'~4.96x10'0Copies/μL的标准品都能产生扩增曲线,而4.96Copies/μL的标准品未能检测到荧光信号。由此可知4.96x10'~4.96x10'0Copies/μL为该方法可以检测到的线性范围,最低检测线为49.6Copies/μL,灵敏性较好。啮齿类动物手术器器械。
2.2.2特异性分析
为了解该PCR检测方法的特异性,使用该PCR方法分别检测多种实验小鼠或啮齿类动物手术器械模型常见病毒，包括四种血清型的登革病毒(I型TH-Sman株;II型NewGuinea株/TH-36株;II型TH87株;IV型H241株)、肠道病毒(EV71、CA10、CA16)、PVM、PHV、REO、MNV及RV。结果显示:只有I~I型登革病毒(TH-Sman株、NewGuinea株/TH-36株、TH87株)产生了扩增曲线,其余病毒均未检测到荧光信号,说明无交叉反应,与预想一致,表明该PCR方法特异性良好。
2.2.3稳定性分析
为了解该PCR方法的稳定性,本研究使用登革热小鼠模型常用的II型登革病毒(NewGuinea株及NGC适应株)来进行测试。分别将两株登革病毒十倍连续稀释,共6个梯度,经PCR检测,实验重复三次。结果显示:每个稀释度样本Ct值的标准差均小于0.5,且CV值均小于5%,表明该方法重复性好,稳定可靠。啮齿类动物手术器械。
2.3DENVRT-PCR方法的初步应用
为确定该PCR方法在登革热动物模型研究中的实际使用效果，使用II型登革病毒NewGuinea株和N10株分别感染I型干扰素受体敲除小鼠(Ifnar1--),获得感染后不同天数的血清样本及感染后第4天的组织样本。经实时荧光定量PCR检测,测得啮齿类动物手术器械体内病毒载量的水平与分布。NewGuinea株感染Ifnar1-/小鼠,血清样本中病毒载量水平在感染后第2天达到高峰,在感染后第8天消失。
由图6可知:登革病毒感染小鼠后,病毒主要分布在小肠、脾、肝、肾和脑。在感染后第4天,不同组织中病毒载量水平具有差异。NewGuinea株感染小鼠在肠、肾、肝组织中未见明显病毒载量，NGC适应株感染小鼠在肠、脾、肾组织中可检测到高水平的病毒核酸,表明了两株登革病毒在小鼠体内的播散和分布情况。本方法使用于登革热小鼠模型的不同组织样本，多数可检测到荧光信号,Ct值主要介于26~31之间,检出率良好,表明本检测方法可应用于登革热啮齿类动物手术器械模型的病毒定量检测。
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