小白鼠解剖器械的临床应用
来源：未知 |发布时间：2021-05-11 15:15|点击:次
实验方法
1.4.1 HSV肾炎模型的建立将24只小鼠随机分为2组。实验组(胆12)接受UNX：质量分数1％戊巴比妥钠溶液(80 mg／kg)腹腔注射麻醉，麻醉满意后常规备皮、消毒、铺无菌巾，小鼠左侧卧位，行背部右侧切口，位置为脊柱右旁开0．5 cm，肋弓下缘起始，长约1 cm竖行切口，暴露右肾，钝性分离肾蒂，1号线结扎肾蒂，从结扎处远端离断肾血管及输尿管，摘除右肾，逐层缝合肌层、皮肤。对照组仅接受假手术(即背部右侧纵行切口切开缝合术，不行右肾摘除)。一周后，上述2组小鼠通过尾静脉注射HSV(2．5 mg／kg)诱导Habu模型(分别标记为HSV组及HSV.UNX组)。小白鼠解剖器械。
2组小鼠均于HSV注射后7 d以1％戊巴比妥钠溶液(80 mg／kg)腹腔注射麻醉，采用心脏取血法采集血液标本用于生化检测；行腹正中切口，取小鼠肾皮质组织，其中一半固定于体积分数10％甲醛溶液中，用于病理学和免疫组织化学检测；另一半肾皮质组织采用筛网技术分离肾小球并置于液氮保存，用于后续蛋白组学和Western blotting检测；取材结束后，以颈椎脱臼法对小鼠实施安死术。小白鼠解剖器械。
1.4.2过碘酸一雪夫染色(PAS染色)观察小鼠肾组绍病理改变 将固定于体积分粼10％甲醛溶液的肾脏组织常规脱水、石蜡包埋、制片。切片常规脱蜡后，放入1％过碘酸浸泡15 min，Schiff液浸泡20 min，苏木素浸泡3 min染细胞核；1％盐酸乙醇分化数秒，水洗后氨水返蓝，流水充分冲洗；85％、95％、100％乙醇梯度脱水、二甲苯透明，树脂封固：于光学显微镜(×400)下观察肾组织病理改变。小白鼠解剖器械。
1.4.3肾组织蛋白组学检测 从HSV组及HSV。
UNX组分别取6只小鼠的。肾组织用于蛋白组学检测。首先，对肾小球蛋白行二维凝胶电泳分析：用裂解缓冲液分离肾小球蛋白，采用50 mmol／LNaOH将蛋白pH值调整为8．5，用裂解液将质量浓度调整为5 mg／mL。将2组样品中等量的蛋白质汇集在一起作为内参。
每个样品取50g蛋白质置于冰上，采用400 pmol Cy3、Cy5分别标记HSV组及HSV.UNX组蛋白，用400pmolCy2标记内参，共30 min，后加入1此赖氨酸(10 mmol／L)淬灭。将50g已标记Cy3及Cy5的蛋白混合后，再与50地标记Cy2的蛋白混合，再加入2倍体积的缓冲液，将加入缓冲液后的样本置于23 cm、pH3，11(NL)IPG上，采用IPGphor IEF系统进行等电聚焦。等电聚焦设置为：30 V共12 h，Grd200 V共6 h，Grd 500 V共3 h，Grd 10000 V共1 h，64 000 V共1 h。将IPG条带置于12％均质聚丙烯酰胺凝胶的顶部，将0．9％琼脂糖包覆于含溴酚蓝流动缓冲液中，置于15℃的EttanDALT 6电泳系统中电泳过夜。电泳结束后，用Typhoon 9400成像仪扫描二维凝胶。小白鼠解剖器械。
根据说明书，使用DeCyder 6.0软件(GE Healthcare)对二维凝胶上的蛋白斑点进行分析，确定2组间存在显著变化的斑点。其次，对2组问存在显著变化的斑点进行蛋白鉴定：对具有显著变化蛋白斑点切胶回收并脱色后，置于10 mmol／L二硫苏糖醇中56℃孵育1 h，在55 mmol／LIAM中室温避光45 min。
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