小鼠固定器的研究结果及讨论
来源：未知 |发布时间：2021-05-10 11:07|点击:次
结果
2．1小鼠固定器抗CZP3抗体水平检测
初免后第2周，实验组小鼠即产生了抗CZP3的抗体，抗体水平与阴性对照组之间的差异有统计学意义(P<0．05)。初免后第3周，实验组的抗体水平迅速上升，到初免后第6周达到峰值，随后开始下降，直到初免后第24周，一直维持在一定水平。t检验结果显示，从初免后第3周到第24周，实验组的抗体水平与阴性对照组之间的差异有高度统计学意义(P<0．01)。
2．2抗体滴度检测
t检验结果显示，当血清稀释至1：4000倍时，实验组的抗体滴度与阴性对照组之问的差异有高度统计学意义(P<0．001)。
2.3间接免疫荧光
问接免疫荧光结果显示，实验组小鼠固定器产生的血清抗体不仅可以识别小鼠卵子的透明带基质，也可与犬卵巢切片中的卵子外透明带基质结合，并且与犬的其他组织无交叉反应。
2．4抗生育效果实验
实验结果显示，生育率由阴性对照组的100％下降至实验组的50％；产仔数由阴性对照组的40只降低到实验组的15只。X2检验结果显示，实验组(2．500只±1．455只)与阴性对照组（6．667只±0．422只)的产仔数之间的差异有统计学意义(P<0．05)。Spearman相关性分析显示，实验组抗体水平与产仔数呈高度负相关(r=一0．9411)。
2．5小鼠卵巢组织学分析
卵巢切片显示，与阴性对照组相比，实验组怀孕小鼠固定器卵巢的卵泡发育正常，初级卵泡、次级卵泡以及成熟卵泡数量均正常；且实验组小鼠在不孕情况下的卵泡也发育正常。
3讨论
与传统疫苗相比，DNA疫苗具有众多优点，如DNA疫苗能够在转染的细胞内表达，产生“内源性”抗原，从而激发CD4+和CD8+T细胞免疫应答，但自Wolff发明DNA疫苗以来，近30年获得批准上市的DNA疫苗却很少(Kutzler&Weiner)。制约DNA疫苗走向临床应用的瓶颈就是相对传统疫苗，DNA疫苗的免疫原性较差(Kimeta)。研究人员为此进行了一系列研究，如使用强有力的启动子(Lukeeta1)、免疫时使用传统佐剂或分子佐剂(Maeta1．；Pengeta1．；Almeidaeta1．；Bergamaschieta1．)、使用靶向DNA疫苗技术(Fossumeta1．；Saigaeta1．；Yeeta1．)、采用先DNA疫苗免疫再蛋白加强免疫或小鼠固定器先蛋白免疫再DNA疫苗加强免疫的免疫策略(Cervantes.Villa.granaeta1.；Chuangeta1．；Fournilliereta1.)，或使用基因枪或电脉冲注射质粒DNA(Broderick&Humeau；Leeeta1．)，以增强机体对DNA疫苗的免疫应答。
电脉冲注射就是利用电流刺激注射部位的肌肉组织，使DNA质粒能够瞬时透过细胞膜进入胞内，从而提高质粒的转染效率。此外电脉冲还可以促进炎性细胞因子的产生，招募抗原递呈细胞及T细胞向免疫部位迁移(Leeeta1.)。
研究显示，利用电脉冲免疫DNA疫苗在Ovisaries(Seheerlineketa1.)、牛Bostaurus(Fowlereta1.)、犬(Shahbazieta1.)、猪Susscrofa(Shengeta1.)等动物实验中都诱导产生了较强的免疫应答。为了增强CZP3DNA疫苗的避孕效果，本研究采用电脉冲方式对小鼠固定器进行DNA疫苗免疫，电脉冲增强了机体对于DNA疫苗的免疫应答，从初免后第2周起，实验组的抗体水平与阴性对照组之间的差异就有统计学意义，并且这种差异持续期近半年。此外，第6周实验组的抗体滴度为1：4000时，与阴性对照组之间的差异仍有统计学意义。
研究表明，以ZP3为靶抗原的避孕疫苗主要是通过2种机制介导不孕：一种机制认为动物免疫ZP3后产生充足的抗体结合于卵子外周的ZP上，阻断了精子与卵子的结合诱导不孕，因此ZP3的抗体水平对于诱导不孕至关重要，当ZP3的抗体水平达到某一临界值时即诱导不孕(Jacksoneta1．；Hardyeta1．；Lloydeta1．)；另一种则认为ZP3在ZP的形成中发挥关键作用，抗ZP3的抗体与ZP3结合后会破坏ZP3的功能，导致形成ZP的厚度减小。
此外，抗ZP3的抗体干扰颗粒细胞紧密附着于卵子，减少了颗粒细胞与卵子的联系，导致卵泡的异常发育，成熟卵泡的减少，诱发卵巢功能早衰。这些卵巢组织结构上的改变协同作用导致了免疫动物的不孕(Maeta1.；Tueta1．；Guptaeta1.)。
间接免疫荧光实验显示，CZP3抗体可以结合于小鼠固定器的ZP基质上，从而阻断精子与ZP的结合。此外，CZP3的抗体水平与产仔数呈负相关，即抗体水平越高，小鼠的产仔数越少，说明当抗CZP3的抗体水平达到某一特定值后可导致小鼠不孕。小鼠的卵巢组织学分析显示，免疫CZP3后抗CZP3的抗体并没有对不孕及怀孕小鼠的卵巢形态结构及发育产生影响，这进一步说明，导致小鼠不孕是抗CZP3的抗体所致。在间接免疫荧光实验中，抗CZP3的抗体不仅可以结合于犬的ZP上，还可以结合于小鼠的ZP上，这可能与CZP3与小鼠固定器的ZP3氨基酸序列具有66．8％的相似性相关。
本研究辅以电脉冲的方式对小鼠注射CZP3DNA疫苗，增强了小鼠免疫应答的水平，同时显著降低了小鼠固定器 的产仔数，并且CZP3DNA疫苗的接种免疫没有导致小鼠的卵巢发生病理学变化，使用安全且具有一定的免疫避孕效果，这为今后开发安全有效的CZP3DNA避孕疫苗奠定了一定的基础。
此文字最终解释权归河南宜慧康科技有限公司所有：详情请咨询河南宜慧康科技有限公司。
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