实验大鼠的补气作用及机制研究方法
来源：未知 |发布时间：2021-03-13 09:57|点击:次
方法
2.1 分组.造模与给药
实验开始后,所有大鼠均在恒温水槽[(25±1) ℃,水深40 cm,下同]中适应性游泳3 d,每天游泳5 min。分组前1天,在大鼠尾部负5%体质量的重物后进行力竭游泳(大鼠游泳最后下沉至鼻尖浸入水中,经10 s后仍不能返回水面即为力竭),剔除负重力竭游泳时间(从开始游泳到出现力竭的时间)差异较大的以及不会游泳的大鼠,保留负重力竭游泳时间在10~50 min的合格大鼠啊。
将合格大鼠(本研究中所有大鼠均合格)按体质量随机分为正常组、模型组、阳性对照组和黄芪总皂苷高、低剂量组,每组8只。正常组大鼠正常饲养,不作特殊处理;其余各组大鼠均采用“饮食不节+疲劳”法"-R构建气虚动物模型;每天上午9:00在恒温水槽中通过尾部负5%体质量的重物进行力竭游泳,并禁食1天后限饲料量饲养,连续21 d。
于造模同时,阳性对照组大鼠灌胃补中益气丸4.5 g/(kg-d)(以生药量计,以水溶解)"，黄芪总皂苷高、低剂量组大鼠分别灌胃黄芪总皂苷252、28 mg/(kg-d)[在结合黄芪的临床用量以及参考文献[14]的基础上,根据提取工艺阀的黄芪总皂苷得率折合后确定的剂量;以总皂苷量计,用水溶解],正常组和模型组大鼠均灌胃等体积水。每天1次,连续给药21 d。
2.2大鼠一般情况观察
实验过程中,观察大鼠的精神状态.活动情况.摄食量.体质量、二便形态以及鼻.唇、耳、爪皮毛色泽等外观、行为的变化。
2.3大鼠负重力竭游泳时间测定
实验结束前1天,按“2.1”项下方法操作,大鼠尾部负5%体质量的重物后在恒温水槽中进行力竭游泳实验,记录其负重力竭游泳时间。
2.4实验取材及处理
末次给药结束后,称定各组大鼠体质量,然后禁食不禁水12h。次日,采用10%水合氯醛(3 mL/kg)腹腔注射麻醉大鼠后,腹主动脉取血,将部分血样在4℃条件下以3 000 r/min离心 15 min ,吸取上层血清,分装后置于―80℃冰箱中保存,待测。取血后将大鼠处死,摘取大鼠新鲜胸腺.脾.肝组织,用冰冷生理盐水冲洗,滤纸吸干,迅速称定质量;在冰块上取肝、脾组织约0.5 g.按1: 9(g/mL)的比例准确加人磷酸盐缓冲液(PBS)制备组织匀浆,置于—80℃冰箱中保存.待测;剩余组织在液氮中快速冷冻.再转人―80℃冰箱中保存,待测。
2.5―指标检测
根据各组大鼠实验结束时的体质量和各脏器质量计算其脏器指数:脏器(胸腺.脾)指数=脏器(胸腺.脾)质量(mg)/体质量(g)。采用相应生化试剂盒检测各组大鼠血清中乳酸、MDA.SOD.ALB水平;采用全自动生化分析仪检测各组大鼠全血的红细胞计数(RBC)、血红蛋白(HGB)水平;采用ELISA法检测各组大鼠血清中CK.LDH水平,肝组织匀浆中ATP.ADP水平、脾T淋巴细胞亚群CD3.CD4水平以及血清中L-2IL-12、TNF-α水平。各指标检测方法均严格按照相应试剂盒或仪器说明书进行。
2.6统计学方法
采用SPSS 21.0软件对数据进行统计分析。试验数据采用x±s表示,多组间比较采用单因素方差分析,方差齐性时两组间比较采用LSD检验,方差不齐时两组间比较采用Tamhanes T2检验。P<0.05表示差异具有统计学意义。
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