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实验大鼠固定架在慢性肾衰竭上的使用方法
来源:未知 |发布时间:2021-03-11 09:53|点击:
  方法
  
  1.2.1分组与流程
  
  1.2.1.1PD治疗30只大鼠适应性喂养3d后,采用5/6肾切除术[即制作CRF大鼠模型。术后第5周为大鼠置入自制的套管式透析装置。置管1周后,开始PD治疗v治疗满2周为试验终点。PD治疗中,准确记录每次治疗的灌注量和引流量,计算相应的超滤量。疗程结束前的最后一次透析治疗不作引流,直接剖开大鼠腹璧准确计量腹腔内腹透液的体积,并与相应大鼠透析治疗期间的引流量作比较,以判断透析治疗过程中引流是否充分。
  
  超滤量(mL)=引流量(rmL)一灌注量(mL)
  实验大鼠固定架
  1.2.1.2盐负荷对CRF腹膜透析大鼠残余肾的影响30只健康大鼠行5/6肾切除并置腹透管(过程同上)后,随机等分成3组,分别予高盐(40 g/L. NaC)、中盐(4 g/L NaCl)和低盐(0.2 g/LNaC]3种饲料喂养,同时开始腹膜透析治疗,透析方案同上。比较透析治疗开始时和透析治疗结束时3组大鼠收缩压(SBP)、血钠(Nat>、血肌酐(Scr)、血尿素氮(BUN)和残余肾肌酐清除率(△CCr)的变化情况。研究终点时取大鼠肾脏组织,作HE 和Masson染色,观察肾脏病理改变情况,进行小管间质纤维化评分并进行组间比较。
  
 
  
  1.2.2套管式透祈管装置本套管式透析装置由下列配件组咸:内管为腹透液进出大鼠腹腔的通道。使用一次性静脉输液器末端的细管制作,长度为9 cm~ll cm。腹腔段有10个的侧孔,辅助引流使用;外管为内管进出大鼠腹腔的通道。使用一次性静脉输液器的输液管制作,长度为4 cm-6 cm。皮下隧道段有3个丝线圈cuff,模仿临床腹透管的涤纶套设计,作用是与皮下组织粘连,阻挡病原体侵人;硅胶管为一段l cm长的硅胶管,固定内管使用。硅胶帽为一段l cm长的硅胶帽,封堵内管管口。硅胶管,硅胶帽和丝线均经过高温高压灭菌(图1)。
  
  1.2.3腹透管至入术30 g/L戊巴比妥钠(45 mg/kg)腹腔注射麻醉大鼠,备皮消毒。于大鼠右侧背部肋弓下 2 em处作1个纵切口,长度1,5 cm。打开大鼠腹腔,于腹膜层作一荷包。将外管放人大鼠腹腔,深度为1 cm。收紧荷包并固定在cuff 上。外管另一端通过皮下隧道后自背部正中线引出, cuff 线缝合固定于皮下。通过外管v将内管置入大鼠腹腔。使内管腹腔段的末端位于大鼠腹部正中线处。使用硅胶管固定内管和硅胶帽封闭内管口。
  
  1.2.4 PD治疗选用含葡萄糖22.7 g/L的低钙腹透液,每次腹透液灌注量为100 mL/ kg,2次/日,留腹4h/次,腹透治疗8 h/日。总疗程2周。若治疗过程中出现腹透管堵塞以致无法引流腹透液,本研究者即在无菌条件下更换内管。更换内管后PD治疗维续。换管后连续3日通过内管注人头孢唑林钠(20 mg/ kg)预防感染。若PD治疗过程中大鼠引流液浑浊,即对该引流液进行血平皿培养。若培养阳性,则诊断相应大鼠为腹腔感染。腹腔感染的大鼠退出研究。
  
  1.2.5 腹膜的肌酐清除规律在PD 治疗方案之外,给大鼠灌注1次22.7 g/L葡萄糖腹透液100 ml/ kg,留腹8 h,并分别在0.0.5,1,1.5,2,2.5,3,3.5,4,4.5,5、6 .7 h引流腹透液,每次引流l mL。测定引流液肌酐浓度(umol/L),以此为y轴,以留腹时间(h)为工轴,绘制散点图并拟合曲线。
  
  1.2.6样品制备血清:剪尾法采血,收集约0.5 mL血液,4℃离心(3 000 r/ min.10 min),收集上清,超低温冰箱冻存。尿液;使用大鼠代谢笼收集大鼠24 h尿液,离心后冻存(过程同血清)。血压;使用无创血压仪测量大鼠血压。肾脏:麻醉大鼠,冰盐水灌注心脏。切取肾脏组织薄片,浸泡在中性福尔马林固定液中,准备制作石蜡切片和染色。
  
  1.2.7生化检测使用全自动生化仪,检测血清中的白蛋白、肌酐.尿素氮.Na水平,腹透液和尿液中的肌酐水平。使用渗透压仪检测血渗量。
  实验大鼠牙剪
  1.2.8病理染色肾脏组织经梯度酒精脱水、石蜡包埋后,使用切片机切成2 um薄片,用粘附载玻片捞片然后烤干。使用HE和MASSON染色试剂盒,按说明步骤完成染色。使用荧光正置显微镜拍片,利用Image-Pro Plus 6.0软件测量Masson染色阳性区域面积占间质总面积的百分比,得出纤维化指数。计算每组大鼠得分的平均分,作为本组的肾脏小管间质纤维化评分的得分。
  
  1.2.9统计分析使用SPSS 20.0统计软件进行数据分析。符合正态分布的计量资料用均数±标准差(宝士SD)的形式表示。肾脏小管间质纤维化评分为等级资料,用中位数与四分位数间距,结果均保留两位小数。透析治疗前后的生化数据比较使用配对检验。同一时间点,组间对比分析采用单因素方差分析(ONE-WAY ANOVA),组间两两对比分析采用LSDt检验v组内进行的不同时间点分析采用配对e检验。肾脏小管间质纤维化评分的对比采用Kruskal-Wallis H检验,两两对比采用Bon-ferroni法。均以P之0.05为结果存在统计学差异。

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