进口的啮齿类动物手术器械好吗？
来源： |发布时间：2021-06-29 14:44|点击:次
1研究方法
1.1实验动物
本实验所用子午沙鼠为实验室繁殖的F1代，其亲本捕自甘肃省武威市民勤县荒漠区。动物饲养在44cm×22cm×16cm的聚碳酸酯笼内，以锯末铺垫，用棉花做巢材，饲喂蔬菜和大小鼠啮齿类动物手术器械维持饲料，水和食物充足。动物饲养在西北师范大学生命科学学院动物饲养室，饲养室室温控制在18℃～24℃，光周期12L∶12D。
1.2动物选择
实验鼠:2017年11月(子午沙鼠的非繁殖期)，随机选择120日龄的雌、雄F1代子午沙鼠各9只进行标记，测量体重、头体长和尾长。
刺激鼠:选择与实验鼠无亲缘关系的45日龄的雌雄子午沙鼠(亚成年个体)，并做标记。
1.3新物体识别实验
分为适应和行为观察两个阶段。适应阶段，将实验鼠啮齿类动物手术器械分别放进观察箱中，并铺上垫料使实验鼠适应环境，每天适应5min，共2d。每次适应后，在换新垫料之前用75%的酒精擦拭对观察箱进行除味，避免实验鼠遗留气味对下一次实验产生影响。行为观察阶段，首先在观察箱中铺上新鲜垫料，将两个相同的物体A、B置于笼子一侧，与笼壁紧贴并与两侧笼壁等距，将实验鼠放进观察箱中与物体相对的一侧(实验鼠背对物体放入)熟悉5min。
然后将实验鼠拿出，15min之后将物体A换成形状材料均不同的物体C。再次将实验鼠背对物体放入笼子中(实验鼠两次放进实验笼中的位置相同)进行3min的行为观察，并且用相机拍摄(每只实验鼠进行实验之前，啮齿类动物手术器械均用75%的酒精对实验笼和实验物体A、B、C进行清理，并更换垫料)(宋广青等，2013)。
1.4社会认知实验
社会认知实验分为两个阶段:第一阶段在第一天完成，首先让实验鼠适应观察箱(44cm×22cm×16cm)10min后将其拿出，放回原来的饲养笼;将同性刺激鼠a(45日龄)固定于观察箱中，再把实验鼠放进观察箱，用摄像机记录实验鼠行为2min后将其拿出，放回原来饲笼;10min后再次将实验鼠放入观察箱，记录其行为2min，如此共重复4次;第5次时，将同性刺激鼠换成b(45日龄)(Dluzenetal.，1993)。啮齿类动物手术器械行为观察第二阶段在24h后进行，即第6次实验，将前一天用过的两只同性刺激鼠a、b分别固定于观察箱的两端，把实验鼠放进观察箱中，记录2min。
1.5免疫组织化学实验免疫组化所用一抗均为兔单克隆抗体
(兔IgG)，购自艾博康生物公司，二抗试剂盒购自博士德生物公司(S-ABC即用型)。所有行为实验结束2d后，对所有实验鼠腹腔注射20%氨基甲酸乙酯麻醉后开胸，收集血液保存于－20℃冰箱待用。
经主动脉灌注0.1mol/LPBS换血后灌注4%多聚甲醛进行前固定，随后取脑放入预冷的4%多聚甲醛固定8～10h(4℃)，之后置于30%蔗糖溶液中放置4℃冰箱直至脑组织沉底。制作冰冻切片，用冰冻切片机沿脑冠状面连续切片，片厚40μm，啮齿类动物手术器械用0.01mol/LPBS(pH7.2～7.4)接片;挑选出切片效果良好的脑片，加入3%H2O2室温孵育5～10min，
然后PBS洗涤3次，每次5min，使用5%BSA封闭液37℃封闭30min，弃去封闭液;后滴加0.01mol/LPBS(pH7.2～7.4)稀释的兔抗OT、AVP、酪氨酸羟化酶(Tyrosinehydroxylase，TH)，4℃孵育48h，0.01mol/LPBS(pH7.2～7.4)冲洗3次，每次5min;滴加二抗，37℃孵育30min，PBS冲洗，5min×3次;滴加SABC，37℃孵育30min后用PBS冲洗，5min×3次;DAB显色10～15min，将组织贴于玻片放置于阴凉干燥处晾干。啮齿类动物手术器械最后梯度酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。
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