实验大鼠器械在葡萄菌球感染上的临床应用
来源：未知 |发布时间：2021-03-12 09:37|点击:次
金黄色葡萄球菌联合大肠埃希菌感染的糖尿病溃疡大鼠模型的建立及评价
糖尿病足溃疡( diabetic foot uleer.DFU)是糖尿病( diabetes)严重并发症之一,15%的糖尿病患者会出现糖尿病足溃疡。40%~70%的足溃疡患者就医时已经发生了感染。
糖尿病足溃疡( diabetic foot uleer.DFU)是糖尿病( diabetes)严重并发症之一,15%的糖尿病患者会出现糖尿病足溃疡。40%~70%的足溃疡患者就医时已经发生了感染。
糖尿病足合并感染时致使遗疡经久难愈的同时提高患肢的截肢风险a-目前糖尿病足溃疡感染病原菌主要分为革兰氏阴性菌、革兰氏阳性菌、真菌3大类。
糖尿病足溃疡感染2种以上病原菌风险达30%以上,金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌分别是革兰氏阳性球菌和革兰氏阴性球菌感染最多的菌种,亦是单菌种感染排名前五位的病原菌型。
本课题组前期的研究中已证实单独使用金黄色葡萄球菌或大肠埃希菌制备糖尿病溃疡感染模型具有一定实用性R-10。本研究旨在高脂饲料喂养结合链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病大鼠基础上采用烫伤法结合皮下注射金黄色葡萄球菌及大肠埃希菌质控菌株建立混合感染性糖尿病遗疡模型,以期为糖尿病混合感染性溃疡模型提供新思路。
1材料与方法
1.1实验动物
雄性SD大鼠,SPF级，4周龄,体重(180士10)g-上海中医药大学实验动物中心提供,饲养室温23士2)℃,相对湿度(56士10)%。
1.2试剂、仪器、饲料
链脲佐菌素(Streptozotocin.STZ);质控菌株大肠埃希菌-ATCC25922,金黄色葡萄球菌-ATCC25923;重组牛碱性成纤维细胞生长因子；烫伤仪。高脂饲料及STZ溶液的制备参考前期研究。
1.3动物分组
40只SD大鼠根据随机数字表分为普通溃疡组和糖尿病模型组(糖尿病遗疡组、糖尿病溃疡治疗组、模型组、模型治疗组）,每组各8只。
1.4模型制备
1.4.1糖尿病模型制备糖尿病模型大鼠采用高脂饲料饲养8周后,禁食24 h,于左下腹腹腔按35mg/kg剂量注射1.5%链脲佐菌素,造模后改为普通饲料饲养。
1.4.2﹑溃疡模型制备普通溃疡组采用普通饲料喂养10周后.糖尿病模型组制备完成2周后,采用戊巴比妥钠(浓度:3%,剂量:2 mL/kg)腹腔注射麻醉,麻醉起效后使用恒温恒压烫伤仪(参数;温度9o℃,压力9.8 N.4 cm”探头)于大鼠背部下端皮肤接触10 s进行烫伤。
1.4.3感染性糖尿病溃疡大鼠模型制备模型组、模型治疗组大鼠在糖尿病遗疡模型制备完成稳定2d 后,刮取传代后菌落金黄色葡萄球菌-ATCC25923.大肠埃希菌-ATCC25922(两者均使用分光光度计,设OD值 600 ,析光度为1 ,调定菌悬液浓度1×10cfu/ mL),分别用磷酸盐缓冲液(PBS液》10倍梯度稀释后于每个创面各皮下注射0.1mL PBS 液。
各组模型建立完成3d后开始换药治疗。糖尿病溃疡治疗组、模型治疗组采用贝复济换药,其余组均采用0.9%生理盐水换药。各组每日换药一次,直至创面全部愈合后取腹主动脉取血离心血清后一80℃保存。
1.5评价指标及检测方法
1.5.1组织形态学观察各组大鼠烫伤后24 h取局部皮肤组织10%甲醛固定行HE染色。
1.5.2病原微生物检测各组大鼠造模完成48 h后,取局部创面分泌物使用Phoenix-100-BD做细菌鉴定。
1.5.3酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组大鼠造模完成后取眼眶血采用ELISA检测方法检测血清高敏C反应蛋白。成纤维细胞生长因子;创面愈合后取腹主动脉血v采用ELISA检测方法检测血清H-CRP.bF-GF。肿瘤坏死因子-a 、糖基化终末产物、白细胞介素-1B、白细胞介素-6、一氧化氮(NO)含量。
1.6统计学处理
采用SPSS 21软件进行统计分析,数据以均数士标准差(x士s)表示,多组间比较采用单因素方差分析(one-way ANOVA),两两比较用LSD-t法,P之0.05为差异有统计学意义。
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