兔子实验使用器械的生产厂家
来源：未知 |发布时间：2021-01-23 09:15|点击:次
兔子实验使用器械的生产厂家
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4、实验兔子手术器械
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河南宜慧康科技有限公司是一家专做进口小动物手术器械，小动物试验器械的公司，产品德国原装进口，质量有保障。近年来一直为很多实验室提供器械，已经与很多院校达成合作关系。
大多数非灵长类哺乳动物的视网膜血管发生在出生后。成年小鼠进行视网膜血管网络系统可以粗略地分析分为3层;位于神经节细胞内通过表面的浅层血管网,位于中国内核层内侧缘和外侧缘的深层血管网“-3。由于啮齿动物视网膜静脉系统局限于二维空间，出生后易于监测和操作，易于观察血管网络的发生和形成，因此啮齿动物视网膜静脉系统已成为研究血管发育的更好的模型系统。
在视网膜病的病理发展过程中,多数导致失明的疾病问题都是学生由于存在异常的眼内血管发生而造成。例如，患有糖尿病视网膜病变的人，视网膜血管结构的改变、视网膜水肿和出血，都会导致视力受损。因此,了解调制视网膜血管生长的机制可以为阐明病理性血管系统发生发展提供相关理论研究依据。
本实验旨在观察啮齿动物视网膜血管和血-视网膜屏障(BRB)的基本发育过程，为进一步研究视网膜疾病中病理性视网膜血管生成和BRB损伤的细胞和分子机制提供依据。
材料和方法
1，实验动物
C57BL/6』小鼠和SD大鼠,雌雄不限,由河南省进行实验研究动物管理中心发展提供。常年室温在22 ~25℃.相对湿度为60~70%。定期进行消毒,房间使用面积5om2。光根据自然的昼夜节律，自由吃喝。仔鼠出生开始当日计为PO（ postnatal day 0 ）。
2．视网膜整体铺片.切片制作及免疫组织化学染色
视网膜铺片采用不同年龄组（Pl、P3、P5 、P7 、P10、P14,P30）的小鼠各12只,切片采用不同年龄组的大鼠各6只。用1％戊巴比妥钠按20mg/kg 体重腹腔注射麻醉后,用4％多聚甲醛（ paraformaldehyde ，PFA，0. 1 mol/L. PB 配置）经左心室进行灌流,取出眼球,剪去眼前节（角膜.品状体） ,体视显微镜下小心剥离出视网膜。将视网膜切成“花状” ，4% pfa 固定于4 ° c 处2ー3h。然后，在0.01 mol/L PBS（pH 7.4）中冲洗三次，每次15分钟。与一级抗体在4℃孵育2 ~ 3d。所用一抗分别为兔抗鼠胶质细胞纤维具有酸性功能蛋白（ glial fibrillary acidicproteins ,GFAP,1: 200,北京中杉金桥国际生物信息技术发展有限责任公司）和兔抗鼠Ⅳ型胶原结合蛋白（Collagen N ,col N .1: 200 , A B756P:Chemicon公司）。0.01mol/L PBS漂洗3次，每次15min。二抗Alex Fluro 568标记羊抗兔lgG （ 1: 600 ,lnvitrogen公司）4℃孵育培养过夜。0.01 mol/L.PES 漂洗3次,每次l5min。将视网膜神经细胞层向上放在干净的幻灯片上，滴封片剂，盖住幻灯片，密封指甲油周围，在荧光显微镜下干燥并观察薄膜（BX61，奥林巴斯）。
制作切片时将固定好的视网膜依次浸泡在10％ ,20％ 30％蔗糖溶液（0. 1 mol/L.PB配置）中脱水至下沉,然后将视网膜平馆在干净的载玻片上,吸干表面周围没有多余的蔗糖标准溶液,滴加胶水于视网膜上,置于一个冷冻切片机的冷台上可以快速冷冻成固体状,修成自己规则型,用冷冻切片机连续切片,切片处理厚度为18pum,切片自然晾干后进行社会组织学生化学方法染色,封片摄片。
3.电镜标本的制作
PO、P3、P14、P30年龄组小鼠各6只。经腹腔进行注射l％戊巴比妥钠（ 20mg/kg）作全身使用麻醉,开胸后经左心室结构灌注4％ PFA和戊二醛溶液混合液（按4:1比例以及混合）至流出的液体逐渐变清。眼球被摘除，视网膜剥落。
视网膜用双面刀垂直切开，形成约2毫米 x2毫米的组织块。4％戊二醛浸泡固定2 ~4h 。0.01 mol/L.PBS漂洗3次,每次15min。1%饥饿酸1~2小时。0.01 mol/L. PES漂洗干净。再经系列丙酮梯度脱水,Epon812浸脂,树脂包埋.按37℃ （ 3h ） ,45T （ 6h）和63 ℃（ 24h））进行聚合,制成电镜标本。70纳米超薄切片，醋酸双氧釉和柠檬酸铅染色，透射电镜观察视网膜各层毛细血管的超微结构。
4。明胶墨汁灌流模型展示自己成年小鼠进行视网膜各层血管网
12只2~3月龄成年小鼠腹腔注射1%戊巴比妥钠(20 mg/kg)麻醉。开胸后先用4％ PFA 经左心室进行灌流至流出的液体逐渐变清,再用60C的6.5％明胶墨汁灌流至全身组织变黑,然后经小鼠出现心脏通过根部采用结扎,放人-20℃冰盒冻存2h 左右。取出眼球,剥离视网膜,剪成“+”字花形,平铺在干净的载玻片上.用0.ol mol/L.PBS封片,指甲油封固,晾干后在显微镜下观察视网膜各层血管网并摄片。
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