BALB/c突变卷毛小鼠肝癌移植模型对比分析
原发性肝细胞癌( hepatocellular carcinoma ，HCC)是临床上常见的恶性肿瘤之一 ，肝癌在全球的死亡率仅次于肺癌和胃癌，位居第三。由于肝癌的危害性逐步上升，全球对肝癌的预防与治疗投入了大量的基础性研究，旨在能够为肝癌的临床治疗提供基础依据，其中建立肝癌动物模型是肝癌临床与基础研究工作中必不可少的工具。由于实验动物的选择有多种，而小鼠作为又经济又易操作的实验动物，常常作为肝癌模型的首选实验动物。BALB/c 卷毛小鼠是本实验室发现的自发突变小鼠，本实验室对其种子资源进行了纯化并展开一系列研究。
前期研究结果提示突变基因对小鼠的免疫器官、血液免疫成分和部分免疫分子均产生了一定的影响，因此本实验对BALB/c突变卷毛小鼠与正常BALB/c小鼠进行肝癌细胞系皮下移植模型和原位肿块移植模型构建的比较分析，以期了解突变小鼠与正常小鼠构建模型是否存在差异，同时探讨是否由于免疫方面的缺陷而使突变小鼠在肿瘤模型构建中更具有优势，为今后将该卷毛突变小鼠可能成为更有优势的肝癌动物模型提供坚实的理论基础。
1材料和方法
1.1实验动物
6周龄SPF级KM小鼠2只，雌性，18~20 g;5~6周龄SPF级BALB/c小鼠20只，雌性，16~18 g，均购自斯贝福(北京)生物技术有限公司[SCXK(京)2016 -0002]。20只SPF级5~6周龄卷毛小鼠:20只，16~18 g，雌性，来源于本实验室近交培育(全同胞兄妹交配)。动物饲养在解放军总医院第五医学中心[ SYXK(军)2017-0016]。饲养环境:温度22C ~25C，湿度40%，自由进食和饮水。本实验通过了解放军总医院第五医学中心动物伦理委员会审查( IACUC-2017-006)。在实验过程中，严格按实验动物使用的3R原则给予人道的关怀。
1.2 主要试剂与仪器
H22肝癌细胞株为本实验室保存。DMEM培养基、胎牛血清均购买自美国Hyclone公司;吸人麻醉剂异氟烷( Isoflurane)。
相差倒置显微镜;离心机;游标卡尺;手术器械和材料由本实验室提供。
1.3 实验方法
1.3. 1皮下肿瘤移植模型建立
将H22肝癌细胞株复苏后腹腔接种于KM小鼠体内，7 d后小鼠腹腔形成含有H22的腹水，无菌抽取腹水于试管中，用生理盐水洗涤2次，离心( 1000r/rminn)5min，弃上清液，台盼蓝染色计数，用生理盐水调整癌细胞数至1x107/mL， 制备成细胞悬液备用。小鼠分为两组: BALB/c小鼠组( 10只)和BALB/e突变卷毛小鼠组(10只)。将上述备用肝癌细胞悬液分别注射于两组小鼠的右侧下肢根部皮下，每只0.2mL，连续观察7d，注射部位出现肿瘤组织提示造模成功。
1.3.2 原位肿瘤移植模型建立
将上述备用肝癌细胞注射接种于KM小鼠的右侧大腿根部皮下，生长一周后，解剖将肿瘤剥离，选取肿瘤组织性状和色泽较好的部分切割成肿瘤组织微块(直径0.5~1 mm)，置于DMEM培养基中。
随后参考文献进行手术，建立原位肿瘤移植模型。术后需观察各组小鼠的活动状态，于15 d后剖腹摘取肝肿瘤。
1.3.3形态学观察
使用游标卡尺测量将上述两种造模方式所得肿瘤均，分别记录肿瘤的长径与短径。按公式计算肿瘤体积(V):V=axb2/2 (a为长径，b为短径)。
随后分别将两组肿瘤组织置人4%甲醛固定，进行HE染色，光镜下对病理形态学进行观察。
1.4统计学方法
肿瘤体积的数据采用SPSS 19. 0统计学软件进行分析，实验数据均采用平均数t标准差( x土s )表示，应用配对t检验进行组间分析比较。P< 0.05与P< 0.01表示差异有统计学意义。
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