高剂量7,12-二甲基苯并蒽诱发的小鼠皮肤鳞状细胞癌模型建立及评价
皮肤癌传统上分为两大类:黑色素瘤和非黑色素瘤皮肤癌(NMSC)。皮肤基底细胞癌(BCC)和鳞状细胞癌(SCC)是NMSC最常见的两种亚型。
一项世界范围的流行病学研究表明,在过去的几十年里,全球SCC的发病率一直在呈上升趋势甲。在我国西部项回顾性研究发现,皮肤SCC的发病率最高,占所有皮肤恶性肿瘤的29.4%,且以每年2.6%的比例逐年上升。
临床上有5%的皮肤SCC可以发生转移3],伴淋巴结转移的患者生存率将明显下降。人乳头瘤病毒的感染、慢性砷中毒、长期暴露于环境致癌物或阳光下均可显著增加皮肤SCC的发病率在初始阶段使用亚致癌剂量的启动剂,然后重复使用促进剂的二阶法是目前科研最常用的小鼠皮肤scC模型建立方法,除此之外还有紫外线照射法二阶法联合UVB照射法等14161方法。二阶法建立小鼠皮肤SCC模型中最常用的启动剂是7,12-二甲基苯并蔥(DMBA)。
DMBA致癌的机理是其活性代谢物被CYP450代谢成致癌物1,2-环氧化物-3,4-二醇DMBA,与DNA形成加合物,进而损伤DNA[II。有研究表明在用DMBA处理小鼠皮肤3~4周后,即可以在皮损中检测到Hrasl基因的第61密码子发生了A-T碱基颠换与二阶法建立小鼠皮肤SCC模型相比,本实验没有使用如佛波酯、巴豆油等试剂作为促进剂,而是在实验的整个过程中使用高剂量的DMBA来缩短实验周期,提高成瘤率。
造模各阶段均严格按照客观量化指标评估,以求为小鼠皮肤SCC模型的建立提供新思路。
1材料与方法
1.1 化学试剂
DMBA分子式:C2.Hc,相对分子量: 256.34,含量≥95%,产品编号:D3254,购自美国Sigma 公司;丙酮分子式:C3H,O,相对分子量: 58.08, 含量:≥99.0%,购自于北京益利精细化学品有限公司。将两者配置成1 mol/L及0.5 mol/L的DMBA丙酮溶液作为诱癌剂。PCNA抗体,产品编号:ab18197,购自于美国Abcum公司。
1.2 实验动物及饲养条件BALB/c小鼠36只,SPF级,雄性,4~6周龄，体重(14士1.5)g,从北京维通利华实验动物技术有限公司引进(实验动物生产许可证号: SCXK(京)2012-0001),饲养于中日友好医院临床研究所动物实验中心。实验前予以适应性饲养1周,动物饲养室为SPF级,室温20°C~24C,每日照明12 h,予小.鼠BALB/c专用饲料和普通水饲养。
1.3 动物分组
36只BALB/c小鼠以随机数字表法分为3组，每组12只。高剂量组(A组):每次使用DMBA 200nmol;低剂量组(B组) :每次使用DMBA 100nmol;空白对照组(C组)。各组小鼠的初始平均体重经方差分析无统计学意义(F =0.076,P>0.05)。
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