实验大鼠开口器多少钱？
来源：未知 |发布时间：2021-04-26 09:33|点击:次
蛋白质印迹法(Western-blot)检测Piwil4、Mael和Ddx4基因在蛋白的表达20周后处死动物并取各组肝组织立即用液氮研磨,加蛋白裂解液提取总蛋白,用BCA试剂盒对总蛋白进行定量。实验大鼠开口器加6×电泳上样缓冲液沸水浴10min,SDS-PAGE电泳(80V30min,100V40min),PVDF转膜(80mA,2h30min),封闭,一抗4℃孵育过夜(GAPDH1∶5000;PIWIL411000;MAEL1∶2000;DDX41∶1000),TBST洗膜5次,HRP标记(山羊抗兔1∶10000)的二抗孵育2h,TBST洗膜5次,加入ECL化学发光试剂进行曝光。
1.7免疫组织化学法检测Piwil4、Mael和Ddx4基因的蛋白表达水平60℃温箱中烘烤60min;二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ浸泡15min,95%乙醇、85%乙醇、75%乙醇浸泡5min,洗涤;用沸腾的10mmol·L-1枸橼酸盐缓冲液洗涤,3%H2O2-甲醇溶液中洗涤15min,5%山羊血清室温封闭40min,加一抗过夜,洗涤,加酶标二抗孵育40min,洗涤,DAB显色液显色10min,蒸馏水终止显色,苏木素染液复染10min,脱色反蓝,封片,显微镜拍片实验大鼠开口器。
1.8统计学方法
数据分析采用SPSS18.0统计学软件,实验均进行3次以上重复,用均数±标准差(x-±s)表示计量资料数据,组之间比较采用t检验,以P<0.05认为有统计学意义。
2结果与分析
2.1肝癌组织病理形态学特征
成功建立实验大鼠开口器肝癌模型,正常组实验大鼠肝组织细胞结构完整,肝细胞排列规则,细胞核形态正常。肝小叶结构正常,未见纤维间隔,未见细胞水肿,未见坏死肝细胞。肝癌模型组实验大鼠肝细胞呈多角形,异型性明显,胞浆丰富,嗜酸性,核大,圆形,有清楚的核仁。分化差异癌细胞异型性明显,常有巨核及多核瘤细胞。
2.2肝癌模型组织中肿瘤标记物(HSP、ARF、ASMA)表达水平结果表明,肿瘤标记物AFP肝癌模型组(6.70±3.17)与正常对照组(0.98±0.13)差异极显著(P<0.05);肿瘤标记物ASMA肝癌模型组(62.63±2.65)与正常对照组(48.09±4.23)差异极显著(P<0.05);肿瘤标记物HSP肝癌模型组(27.43±3.18)与正常对照组(6.64±4.57)差异极显著(P<0.05)。
2.3肝癌模型组织中Piwil4、Mael和Ddx4基因的mRNA表达水平结果表明,肝癌模型组织中Piwill4、Mael和Ddx4mRNA相对表达水平分别为114.8±15.74、5.66±2.02、15.07±6.17,正常对照组mRNA相对表达水平分别为1.18±0.23、1.27±0.27、1.57±0.49。在肝癌模型组织中Piwil4、Mael和Ddx4基因mRNA表达水平明显高于正常肝组织(P<0.05)实验大鼠开口器。
2.4Western-blot法检测肝癌模型组织中PIWIL4、MAEL和DDX4蛋白表达水平结果表明,肝癌模型组中PIWIL4、MAEL和DDX4蛋白表达水平分别为2.23±0.49、0.14±0.02、1.36±0.12,正常对照组蛋白表达水平分别为0.85±0.15、0.04±0.05、0.71±0.11。在肝癌模型组织中PIWIL4、MAEL和DDX4蛋白表达水平明显高于对应的正常肝组织(P<0.05)实验大鼠开口器。
2.5免疫组织化学法检测肝癌模型组织中PIWIL4、MAEL和DDX4蛋白表达水平
结果表明,肝癌模型组中PIWIL4、MAEL、DDX4蛋白表达水平分别为879.9±12.64、904.6±8.73、874.8±7.95,正常对照组蛋白表达水平分别为292.0±3.55、343.1±8.05、290.5±6.09。在肝癌模型组织中PIWIL4、MAEL、DDX4蛋白表达水平明显高于对应的正常肝组织,在肝癌模型组织中高表达(P<0.05)实验大鼠开口器。
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