大鼠固固定架进口的好吗？
来源：未知 |发布时间：2021-04-19 14:02|点击:次
标本制备模型建立成功24 h后，将所有大鼠固定架经腹腔注射麻醉后，从尾静脉取得血液样本，收集于肝素抗凝管中以分离血浆。于大鼠回肠处切取部分回肠肠管(5cm左右)，一部分以10%多聚甲醛固定以行组织病理学分析，一部分留存为做肠道通透性检验的样本，剩余部分加入PBS进行制备组织液匀浆。MDA含量测定按照MDA含量测定试剂盒说明书进行测定，具体为:将回肠组织匀浆在49C条件下3 000 r/min (r=15 cm)离心10 min,转移上清液至1.5 ml离心管中;实验设置标准孔、空白孔、对照孔、测定孔，其混合体系如表1所示(剂量体积均为1 ml)。将上述混合体系充分混匀，95C孵育40 min后流水冷却，4000 r/min (r=15 cm)离心20 min,大鼠固定架，在532nm条件下测定其上清液的OD值。MDA含量计算公式: MDA含量(nmol/ml) = [ ( 测定孔0D值-对照孔OD值) / (标准孔OD值-空白孔OD值)] x标准品浓度(1 x105 μmol/L) x 稀释倍数。
SOD活性测定
SOD活性按照试剂盒说明书进行测定，其混合体系如表2所示，具体为:充分混匀后，37C水浴40 min,各加入2 ml显色剂进行混合，室温静置10 min, 550 nm条件下使用蒸馏水调零，测得各孔OD值。计算公式如下: SOD活性( U/ml) =[(对照孔OD值-测定孔OD值)/对照孔OD值]/50% x反应体系稀释倍数(3. 33/0.03) x 样本测定前稀释倍数。
RT-PCR法检测炎症因子转录水平采用Trizol试剂提取各组大鼠固定架回肠组织RNA,按照反转录试剂盒说明书操作合成eDNA,经过RT-PCR反应体系，以β-actin为内参，分别对各组实验大鼠回肠组织匀浆中相关炎症因子NF-KB、TNF-a、 IL-1β、 IL-6的相对表情况进行测定。利用NCBI软件进行引物设计。
ELISA法检测炎症因子的分泌水平标准 品稀释、加样，用封板膜封板后置37C温育30min,将30倍(48T的20倍)浓缩洗涤液用蒸馏水30倍(48T的20倍)稀释后备用，洗涤，每孔加入酶标试剂50 μl,空白孔除外，温育，洗涤，每孔先加入显色剂A 50μl,再加入显色剂B50 μl,轻轻震荡混匀，37C避光显色15 min,终止反应，以空白孔调零, 450 nm .波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。
肠道通透性检测收 获的肠段用冰凉的krebs-碳酸氢盐缓冲液冲洗，置于冰凉的玻璃板上。大鼠固定架。对于每个肠段，以葡聚糖为内标，测定菊粉的通透性。在肠黏膜下加入放射性标记葡聚糖凝胶( Dextran gel, RPC;总浓度4.7 mol/L)和菊粉(4.2 mol/L)。黏膜-浆膜通量测定采用液体闪烁计数法测量放射性同位素浆膜外观, 3H和14C双重监测。90 min后沿肠系膜边界切开肠段,测量其长度和宽度。菊糖和右旋糖酐的表观渗透率系数计算如QQ下: Papp= .△TxC。xSA x60cm/s，式中( QQ/OT) =通量，单位时间浆膜侧出现的总量( mol/s)，Co 标记物初始浓度(mol/ml), SA肠段表面积(cm2)。
肠道组织学检测将肠组织剩余部分固定在10%缓冲多聚甲醛中1周，石蜡包埋，HE切割染色，3名独立调查员盲法进行组织学评估,取平均评分进行分析。损伤采用半定量分级方案进行分类,根据黏膜损伤类型和黏膜下损伤类型，对各部位进行数值评分。
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