啮齿类动物手术器械种类讨论
来源：未知 |发布时间：2021-05-13 14:37|点击:次
讨论
登革热和严重登革热是由登革病毒感染引起的传染性疾病,已成为全球性的严重公共卫生问题,啮齿类动物手术器械目前仍缺少针对该疾病安全有效的药物和疫苗合适的动物模型是登革热防治产品和策略研究的重要工具。荧光定量PCR方法是感染性模型检测常用的实验方法。本研究旨在评估可应用于登革病毒感染动物模型检测的--步法实时荧光定量PCR方法,从而为登革热小鼠模型的建立提供基础方法,推动疫苗和药物的研发进程。
啮齿类动物手术器械登革热的分子诊断逐渐取代传统的病毒分离方法,成为病毒检测的金标准10-1。在过去十几年中,已经报道了多种基于RT-PCR的方法，主要针对NS1、NS5、3’UTR等基因序列。Lanciotti等人5最初报道了两步嵌套式逆转录PCR,后经Harris等[16]改进为--步多重逆转录PCR用于登革病毒的检测和分型。但使用琼脂糖凝胶电泳分析扩增子大小区分四种血清型的登革病毒,灵敏度较低。
Shu等建立的血清型特异的一步法SYBRGreenI实时荧光定量PCR方法,可以用于登革病毒感染急性期的检测与分型。但由于该染料可非特异性的结合DNA双链,因而假阳性信号产生的机率增加。啮齿类动物手术器械。Klungthong等使用泰国收集的16454例登革热患者阳性血清,提高登革病毒检测的巢式PCR的灵敏度,但该方法需两次扩增步骤,操作相对繁琐。Sasmono等新建立了SimplexaDengue检测方法,提高了检测的灵敏度。但是,目.前登革病毒的分子检测方法主要应用于临床样本,针对登革热动物模型的检测方法较少。
本研究改进并评估检测登革病毒的一步法实时荧光定量PCR方法,应用于登革热啮齿类动物手术器械模型中。相对于普通的荧光定量PCR方法,本检测方法具有以下几个特点。一是使用了新型MGB探针,该探针与一般的TaqMan探针相比具有多种优势。首先，MCB探针在3'端采用非荧光淬灭基团，本身不产生荧光,取代了常规可发光的荧光标记,大大降低
反应的本底信号强度，提高反应的灵敏度。其次，MCB探针比一般探针的Tm值高,约10C左右,增强反应的特异性。二是简化了操作步骤,缩短了检测时间。常规实时荧光定量PCR检测需要进行逆转录及荧光定量两个步骤,所需4~6h不等;而本检测方法通过使用一步法,只需约2h便可得出结果。三是针对特定的病毒基因型。根据病毒包膜蛋白E的抗原性不同,登革病毒分为I~IV个血清型。其中IV型登革病毒的遗传偏差较大,与I~I型存在较大的遗传差异性(33%)。而我们建立的动物模型主要针对I~II型登革病毒，因此,本方法选择的引物和探针也是针对I~I型登革病毒。啮齿类动物手术器械。
本研究使用的登革病毒检测方法具有灵敏度高、特异性强、稳定性高等优点。通过对II型登革病毒不同稀释度的标准品进行检测，最低限度达49.6Copies/μL,灵敏度较好。同时,对4种血清型的登革病毒和多种实验小鼠、小鼠模型常见病毒进行检验,仅登革病毒产生扩增曲线,而EV71、CA10、CA16等其他9株RNA病毒检测结果均呈阴性,表明特异性好。使用12份乳鼠脑组织样品重复测定3次，标准差均小于0.5,变异系数小于5%,表明本方法可重复性高。啮齿类动物手术器械。
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