啮齿类动物手术器械都有哪些？
来源：未知 |发布时间：2021-03-25 09:38|点击:次
葛根对细菌性腹泻模型小鼠淋巴细胞水平和胃肠传输功能的影响研究
胃肠道感染是儿童高发疾病,其中细菌性腹泻因占据重要位置。有研究显示中,Th1.、Th2、Th17淋巴细胞为主要代表的是CD,+T淋巴细胞亚群在感染性疾病和免疫相关等疾病中发挥着重要作用，故假设某种干预措施如果可以调节Th1.、Th2、Th17淋巴细胞的表达,应该可以实现治疗细菌性腹泻的目标。中药复方因服用不便影响了患者的治疗依从性，因此单味中药以其简效便廉的优势逐渐成为研究重点。葛根具有升阳止泻的功效,可有效治疗细菌性腹泻,但其作用机制目前尚不明了,基于此我们以细菌性模型鼠为观察对象,利用葛根干预,以期探讨其可能作用机制，具体如下。
材料与方法.
1材料
1.1动物:30只健康雄性昆明小鼠,均饲养于新疆医科大学实验动物中心。体重20~25 g，平均(22士1.5)g,周龄6~7周,平均(6士0.5)周。饲养环境:温度(24士1.5)°C ,湿度(50士2)%。
1.2药物:葛根粉。提取过程如下:葛根经水提→70%醇沉- >氨水溶解-→氯仿萃取→沉淀→丙酮溶解、回收→浓缩液。将浓缩液溶解成30 mg/(kg·d)水溶性葛根备用。
1.3 试剂与仪器:致病性大肠杆菌、流式细胞仪、血细胞分析仪、胃动素试剂盒、血管活性肠肽。
2研究方法
2.1分组及造模方法:30只健康雄性昆明小鼠，随机分为模型组、干预组及空白组,各10只。各组小鼠体重、周龄等一般情况方面差异无统计学意义(P>0.05),可进行组间比较。依据参考文献对模型组及干预组小鼠进行细菌性腹泻模型制备,具体如下:对模型组.干预组小鼠灌胃0.3 ml的3%碳酸氢钠溶液30 min后再灌入0.5 ml的浓度5 X 10*cfu/ml 致病性EPEC混悬液，随后将小鼠回笼饲养,随后观察各组小鼠的排便情况。空白组小鼠接受等剂量0. 9%Nacl灌胃后回笼饲养。小鼠出现黏液便、稀便视为造模成功。
2.2干预方法:成模后对干预组小鼠进行30 mg/(kg. d)葛根水溶性生物碱药液灌胃，1次/d, 连续灌胃7d;模型组和空白组小鼠接受等体积生理盐水灌胃,连续灌胃7 d。
3观察指标
3.1 腹泻次数:记录小鼠7 d腹泻的总次数、腹泻平均次数。
3.2 血数量变化:千预7 d后各组随机取3只小鼠,取尾静脉血,置于血球血细胞分析仪中进行测定，记录其中白细胞、中性粒细胞百分比、淋巴细胞百分比的数值。
3.3 外周血中Th1. Th2、Th17表达水平检测:取尾静脉血方敝据小鼠淋巴细胞分离液后充分分离出淋巴细胞,收集于流式管内,随后加入10%胎牛血清的RPMI 1640培养基,孵育5 h后加入1 ml的固定/破膜工作液(1 ml Fixation/ Permeabilization Concen-trate加入3 ml Fixation/Permeabilization Diluent稀释),旋涡混匀;再避光孵育30 min,充分离心后摒弃上清液加入1 ml 10X Permeabilization Buffer,离心洗涤细胞,破膜15 min(室温避光),充分离心后摒弃上清液;加入100 μl 1X Permeabilization Buffer,再分别加入荧光素标记的CD. (CD.-FITC)、5 μl藻红蛋白标记的(IFN-γ-PE、IL-4-APC、IL-17A-APC),操作按试剂盒说明书进行,采用流式细胞仪检测Th1、Th2、Th17细胞。
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